Question :

使用LCMS测定以不挥发性流动相条件测出的杂质时，是否还需要重新探讨挥发性流动相条件？

Solution :

不需要。如果使用Trap-free 2维LC/MS系统则可在线变更流动相。

可在线实现不挥发性流动相和挥发性流动相之间的切换。
与Labsolutions联合使用，是非常便利的支持工具。
只须将目标杂质导入MS，而无需担心峰遗失。

Trap-Free 2维LC/MS杂质鉴定系统的分析流程

使用支持工具创建时间程序和批处理表

只需输入在一维UV色谱图上的杂质峰的保留时间，就可编制最适合的阀切换。同时创建用于获取多个杂质与各空白数据的批处理表。

使用支持工具制作时间程序与批处理表

有力支持杂质解析的软件

利用作为LabSolutions附属功能的数据浏览器，比较样品与空白的数据，可方便地确认杂质的质谱图。      

数据浏览器上显示样品与空白数据的实例

⇒（相关信息）基于Trap-Free 2维LC/MS杂质鉴定系统的药物杂质分析

注意事项
1.本系统由LC单元、质谱仪、及启动套件构成。
2.启动套件包括专用软件和一套必要的配管部件。

基于Trap-Free 2维LC/MS杂质鉴定系统的药物杂质分析

    为了提高药物的安全性，需要解析药物中所含杂质有无遗传毒性等严重毒性，这就要求进行结构解析。LC/MS可有效应用于微量杂质的结构解析，但HPLC分析杂质时，经常以210nm等短波长检测，因此，流动相多使用磷酸缓冲液。此时，不能以此流动相将未知杂质导入LC/MS。有时即便缓冲液的pH一致，但因一些杂质的分离状态发生变化，而难以使用LC/MS进行未知杂质的解析。

    图1为阿托伐他汀钙的杂质分析，是将流动相缓冲液从日本药典收录的柠檬酸缓冲液 pH5.0（为不挥发性盐，不能导入LC/MS）变更为同一pH的醋酸缓冲液，将有机溶剂从四氢呋喃/ 乙腈（1/1）混合液变为乙腈时的色谱图。可知主成分的洗脱时间虽然没有大的差异，但杂质的洗脱模式发生了较大变化。因此，为了解析杂质的结构解析，需要以HPLC分析条件下的流动相，将目的杂质导入LC/MS。

    在此介绍应用“Trap-free 2维LC/MS杂质鉴定系统”（图2）进行上述杂质结构解析的实例。

图1　 阿托伐他汀钙の杂质分析例

    在此系统的1维中，以通常的HPLC分析条件进行分离，将需要进行结构解析的杂质峰的峰顶附近导入捕集环路。此环路对于2维的分离起到进样器的作用。2维起到分离1维的流动相成分和目的杂质，以及导入至LC/MS的作用。

    因此， 2维的分离条件几乎不进行单独探讨，使用一般的基于0.1％甲酸/ 乙腈的梯度洗脱导入MS部分。为了进行结构解析，MS使用可实施MSn、获得的精密质量数的LCMS-IT-TOF。

图2　Trap-free2维LC/MS杂质鉴定系统配置
［1维（红色流路）在通常的分析条件下使用］

    图3表示按日本药典收录的分离条件检测的杂质a（含约0.2％，参照图1）的2维的色谱图。没有进行捕集浓缩，将峰顶附近导入2维，去除了来自1维流动相的影响，可将目的杂质导入MS。图4表示对此杂质获得的MS谱图。

    可同时进行正负离子测定，可测定质量数信息。

图3　杂质a的2维色谱图

图4　杂质a的MS谱图

    杂质a的m/z 718的MS/MS谱图结果如图5所示。将本谱图与主成分阿托伐他汀的MS/MS谱图进行比较，推测杂质a的结构为图6。并且，对于更微量的杂质b（约0.01％，参照图1），如图7所示，能够以出色的S/N比获得正、负极性的质谱图。

图5　杂质a的MS/MS谱图

图6　杂质a的推测结构

图7 杂质b的MS谱图